EXTRACCIÓN DEL ADN DE TOMATE.


INTRODUCCIÓN:

El ácido desoxirribonucleido, (ADN), es un ácido nucleico que contiene las instrucciones genéticas usadas en el desarrollo, funcionamiento de todos los organismos vivos y algunos virus, también es responsable de su transmisión hereditaria.La función principal de la molécula de ADN es el almacenamiento a largo plazo de información para construir otros componentes de las células, como las proteínas y las moléculas de ARN. Los segmentos de ADN que llevan esta información genética son llamados genes, pero las otras secuencias de ADN tienen propósitos estructurales o toman parte en la regulación del uso de esta información genética.
ESTRUCTURA:
El ADN es una molécula bicatenaria, es decir, está formada por dos cadenas dispuestas de forma antiparalela y con las bases nitrogenadas enfrentadas. En su estructura tridimensional, se distinguen distintos niveles:

• ESTRUCTURA PRIMARIA:

Secuencia de nucleótidos encadenados. Es en estas cadenas donde se encuentra la información genética, y dado que el esqueleto es el mismo para todos, la diferencia de la información radica en la distinta secuencia de bases nitrogenadas. Esta secuencia presenta un código, que determina una información u otra, según el orden de las bases.

• ESTRUCTURA SECUNDARIA:

Es una estructura en doble hélice. Permite explicar el almacenamiento de la información genética y el mecanismo de duplicación del ADN. Fue postulada por Watson y Crick, basándose en la difracción de rayos X que habían realizado Franklin y Wilkins, y en la equivalencia de bases de Chargaff, según la cual la suma de adeninas más guaninas es igual a la suma de timinas más citosinas.

Es una cadena doble, dextrógira o levógira, según el tipo de ADN. Ambas cadenas son complementarias, pues la adenina y la guanina de una cadena se unen, respectivamente, a la timina y la citosina de la otra. Ambas cadenas son antiparalelas, pues el extremo 3´ de una se enfrenta al extremo 5' de la homóloga.

Existen tres modelos de ADN. El ADN de tipo B es el más abundante y es el que tiene la estructura descrita por Watson y Crick.

• ESTRUCTURA TERCIARIA:

Se refiere a cómo se almacena el ADN en un espacio reducido, para formar los cromosomas. Varía según se trate de organismos procariotas o eucariotas:

1. En procariotas el ADN se pliega como una súper-hélice, generalmente en forma circular y asociada a una pequeña cantidad de proteínas. Lo mismo ocurre en orgánulos celulares como las mitocondrias y en los cloroplastos.
2. En eucariotas, dado que la cantidad de ADN de cada cromosoma es muy grande, el empaquetamiento ha de ser más complejo y compacto; para ello se necesita la presencia de proteínas, como las histonas y otras proteínas de naturaleza no histónica (en los espermatozoides estas proteínas son las protaminas).

• ESTRUCTURA CUATERNARIA:

La cromatina presente en el núcleo tiene un grosor de 300 Å, pues la fibra de cromatina de 100 Å se enrolla formando una fibra de cromatina de 300 Å. El enrollamiento de los nucleosomas recibe el nombre de solenoide. Dichos solenoides se enrollan formando la cromatina del núcleo interfásico de la célula eucariota. Cuando la célula entra en división, el ADN se compacta más, formando así los cromosomas.

• ESTRUCTURA DOBLE HÉLICE:

La conformación que adopta el ADN depende de su secuencia, la cantidad y dirección de superenrollamiento que presenta, la presencia de modificaciones químicas en las bases y las condiciones de la solución, tales como la concentración de iones de metales y poliaminas.​ De las tres conformaciones, la forma "B" es la más común en las condiciones existentes en las células. Las dos dobles hélices alternativas del ADN difieren en su geometría y dimensiones.

La forma "A" es una espiral que gira hacia la derecha, más amplia que la "B", con una hendidura menor superficial y más amplia, y una hendidura mayor más estrecha y profunda. La forma "A" ocurre en condiciones no fisiológicas en formas deshidratadas de ADN, mientras que en la célula puede producirse en apareamientos híbridos de hebras ADN-ARN, además de en complejos enzima-ADN.

¿QUE ES LA ELECTROFORESIS DEL ADN? 

Electroforesis.

La electroforesis es una técnica para la separación de moléculas según la movilidad de éstas en un campo eléctrico.1​La separación puede realizarse sobre la superficie hidratada de un soporte sólido (p. ej., electroforesis en papel o en acetato de celulosa), a través de una matriz porosa (electroforesis en gel), o bien en disolución (electroforesis libre). Dependiendo de la técnica que se use, la separación obedece en distinta medida a la carga eléctrica de las moléculas y a su masa.

MATERIAL NECESARIO:

• Hoja de tomate
• Tubos
• Eppendorf
• Gradilla
• SDS
• Pipeta Eppendorf.
• Tampón de extracción (Tris 100mM ph8, EDTA 50mM ph 8, y NaCl)

HIPÓTESIS:

Si realizamos correctamente la práctica, visualizaremos el ADN del tomate, que es una mancha pequeña blanquezina en el tubo.

OBJETIVOS GENERALES Y ESPECÍFICOS:

Nuestro objetivo de este experimento es poder extraer el ADN de  la hoja del tomate y poder visualizarlo. 

MÉTODO DE EXPERIMENTACIÓN:

1.  Cogeremos los tubos pequeños y depositaremos un trozo pequeño de hoja de tomate.
2. En cada tubo, añadiremos 250 ml de tampón de extracción.
3. Con un palo pequeño trituraremos la hoja, hasta que no queden restos.
4. Añadiremos 250 de tampón de extracción.
5. Añadir 35 ml de SDS, y agitaremos suavemente para no formar espuma.
6.  Lo incubaremos a temperatura ambiente durante 5 minutos.
7. Añadiremos 130 de acetato de potasio 5M.
8. Centrifugar los tubos a 13.000 rpm durante 10 minutos.
9. Pasaremos el sobrenadante (500ml) a otro tubo, sin arrastrar los restos.
10. Añadiremos 500ml de isopropanol y 60ml AcNa.
11. Se incuba a temperatura ambiente durante 10 minutos, y centrifugaremos a 12.500 rpm otros 10 min.
12. Se elimina el sobrenadante.
13. Añadiremos 300ml de etanol al 70% y golpearemos el tubo de extracción.
14. Por último, lo dejaremos centrifugar a 12.500rpm durante 5 min.

OBTENCIÓN DE RESULTADOS:

tubo donde depositaremos la hoja.
Autor: Victor Amorós.

Centrifugando la muestra a 13000 rpm durante 10 minutos.
Autor: Victor Amorós.

Hoja triturada mezclada con TRIS.
Autor: Víctor Amorós.

Imagen del ADN (mancha blanquecina)
Autor: Nerea Pons.

ANÁLISIS DE RESULTADOS:

Hemos podido obtener el ADN ya que lo hemos podido observar perfectamente. Seguidamente la muestra de ADN obtenida realizaremos un análisis para poder averiguar la genética de la planta.

CONCLUSIÓN:

El SDS rompió las membranas de los orgánulos para poder liberar el ADN. Además pudimos conocer los datos del ADN. Y lo observamos sin ningun tipo de problema, ya que realizamos correctamente la práctica.

ERRORES DE LA PRÁCTICA:

El material de laboratorio no estaba estirilizado. También tuvimos el grave error de la falta de tiempo, pero no nos supuso un gran problema ya que pudimos realizar bien la práctica. La mayoria de gente no llevaba batas, y no se utilizaron guantes.

CONFIRMACIÓN O RECHAZO DE LA HIPÓTESIS:

Confirmo la hipótesis ya que pudimos extraer y visualizar correctamente el ADN, ya que se podia ver una minúscula mancha blanquezina en el tubo.